一、產(chǎn)品規(guī)格

產(chǎn)品名稱：creatinine檢測試劑盒

品牌：普美生物

貨號：PMK1878

規(guī)格：48T/96T

二、產(chǎn)品基本介紹

creatinine檢測試劑盒

creatinine（creatinine，Cr）是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，主要由腎小球濾過排出體外。血中的creatinine來源包括外源性和內(nèi)源性兩部分。外源性creatinine

是肉類食物在體內(nèi)代謝后的產(chǎn)物；內(nèi)源性creatinine是體內(nèi)肌肉組織代謝的產(chǎn)物。血creatinine幾乎全部經(jīng)腎小球濾過進(jìn)入原尿，并且不被腎小管重吸收；內(nèi)源性creatinine每日生成量幾乎保持恒定，嚴(yán)格控制外源性creatinine的攝入時，血creatinine濃度為穩(wěn)定值，因此，測定血creatinine濃度可以反映腎小球的濾過功能。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法，用于檢測樣本中creatinine含量。其原理是：creatinine酶可催化creatinine產(chǎn)生肌酸，肌酸酶催化肌酸產(chǎn)生肌氨酸和尿素。肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化產(chǎn)生過氧化氫，過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基phenazone偶聯(lián)酚，生成紅色醌類化合物；在500nm有特征吸收峰。測500nm處的吸光值，即可測定樣品中creatinine含量。

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備耗材：

酶標(biāo)儀或可見分光光度計（能測500nm處的吸光度）

恒溫箱、制冰機、低溫離心機

96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭

試劑準(zhǔn)備：

提取液：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃保存。

試劑一：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃避光保存。

試劑二：臨用前96T加入5mL 試劑三，48T加入2.5mL 試劑三充分混勻待用。用不完的試劑可4℃保存一周或分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

試劑三：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃保存。

工作液的配制：每孔配制200µL工作液：吸取50µL溶解后的試劑二，150µL 試劑一。工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，根據(jù)需要測定的樣本數(shù)按比例配制。

標(biāo)準(zhǔn)品：含10 mgcreatinine，臨用前加入1mL去離子水溶解得10 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品。溶解后的標(biāo)準(zhǔn)品可4℃保存1個月或分裝-20℃長期保存。

標(biāo)準(zhǔn)曲線設(shè)置：按下表所示，用去離子水將10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：每次實驗，請使用新配制的標(biāo)準(zhǔn)品。

樣品制備：

動物組織：稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液，冰浴勻漿，12,000g，4℃離心10min，取上清液待測。

細(xì)胞或細(xì)菌：收集500萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，用冷PBS清洗細(xì)胞或細(xì)菌，離心后棄上清，加入1mL提取液，冰浴超聲波破碎細(xì)胞5min（功率20%或200W，超聲3s，間隔7s，重復(fù)30次），然后12,000g，4℃離心10min，取上清待測。

血清（漿）、尿液等液體樣本：直接測定。

注意：推薦使用新鮮血清樣本，如果不立即進(jìn)行實驗，樣本可在-80℃保存6個月。如需測定蛋白濃度，推薦使用BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒進(jìn)行樣本蛋白質(zhì)濃度測定。

實驗步驟：

1. 酶標(biāo)儀或可見分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到500nm，可見分光光度計去離子水調(diào)零；恒溫箱預(yù)熱到37℃。

2. 樣本測定（在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列試劑）：

混勻，37℃靜置60min，測定500nm 處吸光值A。空白孔記為A_空，標(biāo)準(zhǔn)孔記為A_標(biāo)，測定孔記為A_測，對照孔記為A_對。計算ΔA_測=A_測-A_對，ΔA_標(biāo)=A_標(biāo)-A_空。

注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果ΔA小于0.005可適當(dāng)加大樣本量。如果ΔA大于 1.0，樣本可用提取液適當(dāng)稀釋，計算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，或減少提取用樣本量。

結(jié)果計算：

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為y軸，ΔA_標(biāo)為x軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（濃度為y軸更方便計算結(jié)果）。將ΔA_測帶入方程得到y值（mg/mL）。

2. creatinine含量計算

1）按照樣本鮮重計算

creatinine含量（mg/g 鮮重）=y×V_樣÷(W×V_樣÷V_樣總)×n=y÷W×n

2）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算

creatinine含量（mg/10⁴ cell）=y×V_樣÷(細(xì)胞數(shù)量×V_樣÷V_樣總)×n=y÷500×n=0.002×y×n

3）按照液體體積計算

creatinine含量（mg/mL）=y×V_樣÷V_樣×n=y×n

4）按照蛋白濃度計算

creatinine含量（mg/mg prot）= y×V_樣÷(V_樣×Cpr) ×n=y÷Cpr×n

V_樣：加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；V_樣總：加入提取液體積，1mL；n：樣本稀釋倍數(shù)； Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；500：細(xì)胞數(shù)量，500萬。

三、品牌介紹

湖北普美生物科技有限公司成立于2022年，專注于生命科學(xué)領(lǐng)域的產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)與銷售。公司以“創(chuàng)新驅(qū)動、品質(zhì)為先"為理念，致力于為科研人員提供高品質(zhì)的科研工具和技術(shù)支持，助力生命科學(xué)研究的發(fā)展。依托的科研團隊和創(chuàng)新的生產(chǎn)技術(shù)，截至目前，公司已發(fā)表學(xué)術(shù)論文千余篇，擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的超過百項。普美生物建立有的生產(chǎn)和質(zhì)控體系，確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠。公司主要產(chǎn)品涵蓋了分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)及生物化學(xué)等多個領(lǐng)域，滿足不同科研需求。此外，普美生物還積極與高校和科研機構(gòu)合作，共同推動前沿技術(shù)的轉(zhuǎn)化與應(yīng)用。展望未來，湖北普美生物將繼續(xù)秉持“為科學(xué)家提供可信賴的科研工具"的宗旨，力求成為生命科學(xué)領(lǐng)域的企業(yè)。我們期待與*的科研機構(gòu)和合作伙伴攜手并進(jìn)，共同為人類健康與生命科學(xué)的進(jìn)步貢獻(xiàn)力量。

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